"Uus koronaarviiruse kopsupõletiku diagnoosimise ja ravi programm (9. väljaanne)" kasutab nukleiinhapete tuvastamise Ct väärtust ≥35 kui ühte olulist alust isolatsiooni juhtimise või vabastamise vabastamisel.Niisiis, mida tähistab nukleiinhappe tuvastamise komplekti Ct väärtus?Kas erinevate komplektide Ct väärtused on võrreldavad?Kas mida madalam on Ct väärtus, seda parem on komplekti jõudlus?
Ct väärtus (Threshold Cycle, Ct) on PCR tsüklite arv, kui reaalajas fluorestsentsi kvantitatiivse fluorestsentssignaali intensiivsus ületab seatud läve.Nukleiinhapete tuvastamise komplektid võtavad näiteks uue krooni.Sama komplekti sama reaktsiooni korral kahe viirust sisaldava proovi A ja B tuvastamiseks esindab Ct väärtuse suurus teatud määral viiruse geeni koopiate arvu, st viiruse koormust.Mida madalam on proovi B Ct, seda suurem on viiruskoormus.Ct väärtus on pöördvõrdeline viiruse koormuse ja selle nakkavusega.Erinevate reaalajas fluorestsentsi kvantitatiivsete komplektide plusse ja miinuseid ei saa hinnata ainult Ct väärtuse suuruse järgi, sest erinevate komplektide Ct väärtused ei ole võrreldavad.Komplekti jõudluse hindamist tuleb mõõta tundlikkuse (minimaalne avastamispiir), spetsiifilisuse, täpsuse, stabiilsuse ja diagnostilise rakenduse aspektidest.Igal reaktiivitootjal on oma kaheksateist liiki võitluskunste ja neil on rakenduses oma maagilised jõud, nii et ma ei hakka siin detailidesse laskuma.
Tavaliste reaalajas kvantitatiivse PCR (QPCR) analüüsiinstrumentide/süsteemide puhul on Ct väärtuste hankimine ja nende laialdane kasutamine patogeenide tuvastamise rakendustes kõigile tuttav.Tööstuse arengu ja tehnoloogia arenguga on QPCR-seadmetel ja reaktiividel tekkinud võimalused ja väljakutsed.Yiou Think Tank (2021. aasta uurimisaruanne Hiina geenitestimise tööstuse kohta: tehnoloogia) analüüsis, et enamik minu riigi QPCR-tööstuse ettevõtteid seisavad silmitsi tavaliste tehnoloogial põhinevate probleemidega.Nende probleemide lahendamiseks jagunevad lahendused peamiselt kahte tüüpi: tehnoloogia täiustamise kiirendamine ja uute tehnoloogiate kasutuselevõtt.
QPCR-i molekulaardiagnostika POCT on üks tööstuse arengusuundi ning jõudluse parandamine on oluline tegur tehnoloogia rakendamise kiirendamisel.Kuidas optimeerida ühe prooviga QPCR läbilaskevõimega POCT-seadmete puhul ühe reaktsiooni põhiparameetri Ct väärtust teadus- ja arendustegevuses?Sama varustus, sama reaktsioonisüsteem ja sama matriitsi kontsentratsioon, teoreetiliselt, mida suurem on üksiku reaktsiooni Ct väärtus, seda madalam on ensüümi efektiivsus reaktsioonis.
Ensüümreaktsiooni efektiivsuse parandamise ja Ct väärtuse optimeerimise käigus saab kõigepealt analüüsida tüüpilist 40 PCR tsükli fluorestsentsi kvantitatiivset amplifikatsioonikõverat.Alloleval joonisel olev amplifikatsioonikõver on jagatud fluorestsentsi taustafaasiks, eksponentsiaalseks amplifikatsioonifaasiks, lineaarseks faasiks ja platoofaasiks.Madalama fluorestsentsfooni saavutamiseks, nii palju kui võimalik eristada seda varajase eksponentsiaalse amplifikatsiooni fluorestsentsi väärtusest, on vaja testida reaktsiooni kulumaterjali kandja, praimeri sondi disaini sõelumise ja reaktsioonipuhvri süsteemi järgi.Eksponentsiaalne amplifikatsiooniperiood on ensüümi aktiivsuse kõige otsesem reaktsioon ning see on ka tõend POCT-seadmete, reaktsioonikandjate ja reaktiivide täiuslikust koordineerimisest.Praegu tuleb seadmete temperatuuri reguleerimist, optilise signaali hankimist ja analüüsi, kandja bioühilduvust ja reaktiivide süsteemi jõudlust kõigis aspektides reguleerida ja testida.Lõpuks on kogu võimendus lõpule viidud ja tulemused tuleb esitada range andmealgoritmi abil, et saada mõistlik Ct väärtus.
Väike samm Ct väärtuse optimeerimisel on teadus- ja arendustöötajate lugematu arv samme.Päeva ja öö ärevuses ja elevuses, iga kord, kui "mägesid ja jõgesid pole kuskil näha, pajud on tumedad ja lilled säravad ja on veel üks küla", mis annab meile julgust ja kirge edasi liikuda. uuesti.
Postitusaeg: 29. september 2022